支原體檢測試劑盒
貨號：CA1080
保存：4℃保存，有效期為 2 年，Hoechst 工作液需要避光保存。

產品內容：
Hoechst 33258 工作液 50ml
固定液  50ml
抗熒光衰減封片液  10ml
說明書  1 份

產品簡介：
    本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結合到 DNA 的 A-T 富集區域，因為支原體的 DNA 中 A-T 含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的 DNA 染色斑，說明有支原體污染。
    Hoechst 33258 的大激發波長為 346nm，大發射波長為 460nm；Hoechst 33258 和雙鏈 DNA 結合后，大激發波長為 352nm，大發射波長為 461nm。

操作步驟：
貼壁細胞：
1、被檢細胞接種于無菌的 6 孔細胞培養板中，接種密度為 1-2×10 4 。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。
2、5 天后，先吸去培養液，再加入 1ml 的固定液，靜置 20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置 15-20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

懸浮細胞：
1、收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。
2、將收集的細胞涂片于載玻片上，再加 1ml 的固定液，靜置 20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置 15～20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，用無菌水洗滌玻片 3 次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

結果判斷（參考）：
陰性：僅見細胞的細胞核呈現黃綠色熒光。
陽性：除細胞外，細胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。

注意事項：
1．Hoechst 工作液對人體有害，請注意防護。
2．固定液有刺激性氣味，建議在通風櫥進行固定。
3．支原體檢測時，好用不含抗生素的培養液培養 2～3 代，這樣容易避免假陰性結果。
4．本試劑盒用于 6 孔板檢測時，可以進行 50 次檢測反應。
5． 檢測支原體污染， 可以使用支原體高效 Vero 細胞， 這樣可以提高檢測靈敏度， 即將被檢測樣品接種于 Vero細胞進行檢測。

相關產品：
P2100 10× 多聚賴氨酸
S2100 抗熒光衰減封片劑
C0020 Hoechst 33258 染色液（即用型）

支原體檢測試劑盒訂購說明：

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運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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