蛋白質純化試劑GST標簽純化樹脂（GST Resin）
貨號 ：P2020
規 格 ：5ml/10ml
保存 ：4℃保存，有效期少一年

產品簡介 ：
    pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶融合， 因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。
    GSTs 是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 對底物的親和力是亞毫摩爾級的，因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹脂對 GST 及其融合蛋白的純化效率很高?？梢杂煤坞x谷胱甘肽的緩沖液洗脫結合 GST 融合蛋白。樹脂用 3mol/L NaCl 的緩沖液再生。
    谷胱甘肽瓊脂糖對 GST 融合蛋白的結合能力很強（每毫升柱床體積的樹脂能結合 8 毫克融合蛋白） 。
 

特性:
粒度：45-165um 流速：75cm/h
工作 PH:4-10 耐壓:0.3Mpa
載量:＞5mg 谷胱甘肽 S-轉移酶

使用說明 ：
谷胱甘肽樹脂的處理:
    1.輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
    2.取部分勻漿放入 15ml 聚丙烯管（每 100ml 細菌培養物大約需要 2ml 勻漿） 。
    3.4℃ 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清。
    4.在樹脂中加入 10 倍柱床體積預冷的 PBS，顛倒數次混勻，4℃ 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清。
    5.每毫升樹脂加入 1 毫升冷的 PBS，制成 50%勻漿，顛倒數次，混合均勻，懸液冰上放置待用。

制備細胞抽提物 ：
    6.每 100 毫升培養物的細胞沉淀重懸于 4mlPBS 緩沖液中。
    7.加入溶菌酶終濃度為 1mg/ml,冰上放置 30 分鐘。
    8.用針筒將 10ml 濃度為 0.2%的 TritonX-100 強行注入黏稠的細胞裂解物中，劇烈振動數次混勻。加入DNase 和 RNase 終濃度 5ug/ml, 4℃振動溫育 10 分鐘，4℃ 3000 g 離心 30 分鐘，去除不溶性細胞碎片，上清轉移到一只新管中，加入 DTT 終濃度1mmol/L。純化融合蛋白：
    9.細胞裂解物與適量 50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每 100 毫升細菌培養物加 2ml 樹脂，于室溫輕搖 30min。
    10.混合物于 4℃以 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。
    11.沉淀中加入 10 倍柱床體積的冷的 PBS，顛倒離心管數次混勻，洗去未與樹脂結合的蛋白。
    12.4℃以 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。
    13.重復步驟 11 和 12 兩次。
    14.結合的 GST 融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫， 也可用凝血酶、 腸激酶或 Xa 因子切割， 釋放靶蛋白。用谷胱甘肽洗脫融合蛋白 ：
    a.沉淀中加入 1 倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動 10min，洗脫樹脂上結合的蛋白。
    b. 4℃以 500 g 離心 5 分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移新管中。
    c.重復步驟 a 和 b 兩次，合并 3 次上清。

蛋白酶解從結合的 GST  融合蛋白上回收靶蛋白 ：
    a.  在結合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或 Xa 因子（根據融合蛋白中的位點選擇） ，每 ml樹脂加入 50 單位溶于 1mlPBS 的蛋白酶。顛倒離心管數次混勻，室溫下振蕩 2—16 小時。用小規模實驗確定時間。
    b.4℃以 500 g 離心 5 分鐘，上清小心移新管中。 （GST 仍結合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
   15.10% SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質組成。

試劑配制：
谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L 還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)

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