說明：熒光色素；用于DNA、染色體和核酸的染色；熒光染色法和免疫熒光技術。Hoechst 33258 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強烈的藍色熒光，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258 常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測，也可以用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。

物理性狀：黃色深黃色粉末；溶于水，黃或棕色溶液，參考濃度為9.80 - 10.20 mg/ml；熔點＞300℃。

用途：細胞遺傳學研究的常用試劑，熒光染色細胞的DNA ，插入DNA的A-T區，具有低的細胞毒性，形成膜滲透性熒光DNA鏈。

用于細胞核染色時，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

熒光染料 Hoechst 33258

別名：2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)- 2,5'-bi(1H-benzimidazole) trihydrochloride;2-[2- (4-Hydroxyphenyl)-6-benzimidazoyl]-6-(1-methyl-4- piperazyl)benzimidazole trihydrochloride;HOE 33258； Hoechst 33258

配制母液

Hoechst 33258溶于水，溶解度可達10mg/ml。因此可配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。

注意事項

1) Hoechst 33258 對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2) 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3) 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.   用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液。

2.   固定的細胞或組織染色：

對于固定的細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續步驟進行Hoechst33258染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續的Hoechst 33258染色。

a) 對于貼壁細胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞：少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

b)  吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

c) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發波長350nm，發射波長460nm。

3.  活細胞或組織染色：

a) 細胞培養物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細胞培養基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液，對于96孔板一個孔需加入100μl染色液。

b) 在 37℃培養細胞 10～20 分鐘。

c) 用 PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

d) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發波長350nm，發射波長460nm。

 相關文獻：

《Dioscin-6′-O-acetate inhibits lung cancer cell proliferation via inducing cell cycle arrest and caspase-dependent apoptosis》 作者:XuejiaoLiaZhuoQubSongsongJingcXiaLiaChengchengZhaoaShuliMandYingWangeWenyuanGaoac 期刊:Phytomedicine 影響因子:3.61 PMID:30668391
《Protective effect of 17β-estradiol on hydrogen peroxide induced apoptosis of rat nucleus pulposus cells》 作者:Sheng-Hua Ning, Si-Dong Yang, Xu Zhang, Huan-Liu, Hai-Kun Wei, Hai-Ying Wang, Da-Long Yang, Wen-Yuan Ding 期刊:CLINICAL 影響因子:0.848 PMID:
《Protein kinase Cα inhibits myocardin-induced cardiomyocyte hypertrophy through the promotion of myocardin phosphorylation》 作者:Weizong Li,  Nan Wang,  Man Li,  Huiqin Gong,  Xinghua Liao, Xiaolong Yang , Tongcun Zhang 期刊:Acta Biochimica et Biophysica Sinica 影響因子:1.807 PMID:26206583
《Ethyl Pyruvate Attenuates CaCl2-Induced Tubular Epithelial Cell Injury by Inhibiting Autophagy and Inflammatory Responses》 作者:Zhao J， Cheng J， Li C， Xu M，Ma C， Qin L， Yi K， Liao N 期刊:kidney blood pressure research 影響因子:2.123 PMID:30352436
 

熒光染料 Hoechst 33258