產品名稱:谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒產品英文名:Glutathione Peroxidase (GPX) Assay Kit產品貨號:BC1190 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓產品規格:50管/48樣 產品商標:solarbio 保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:1600 庫存狀態:現貨 關鍵字:谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GPX含量檢測|試劑盒| 簡要介紹: 氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又稱為二硫代谷胱甘肽,是兩分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG會被谷胱甘肽還原酶還原成GSH,因此機體中大多數是以還原型形式存在。測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。本試劑盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-雙-(2-硝基ben甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應產生2-硝基-5-巰基ben甲酸,2-硝基-5-巰基ben甲酸在波長412nm處具有大光吸收的特點,通過2-乙烯吡dian抑制樣品中原有的還原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽還原酶將GSSG還原為GSH,借此測定氧化型谷胱甘肽的含量。
產品詳細描述 產品內容: 試劑一:液體×1瓶,4℃保存。 試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。 試劑三:液體×1支,-20℃保存。 試劑四:液體×1瓶,4℃保存。 工作液配制:臨用前,在試劑二中加入試劑一40 mL,充分震蕩溶解后加入全部試劑三,混勻。(當天用完) 產品說明: 谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)是谷胱甘肽氧化還原循環中催化還原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,從而保護生物膜免受ROS的損害,維持細胞的正常功能;而且具有保護肝臟、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。 GSH-Px催化H2O2氧化GSH,產生GSSG;谷胱甘肽還原酶(GR)催化NADPH還原GSSG,再生GSH,同時NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收 谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒 自備儀器和用品: 紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。 操作步驟: 一、粗酶液提?。?/span> - 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取0.1g 組織,加入1mL 試劑一)進行冰浴勻漿。10000rpm,4℃離心10min,取上清置冰上待測(如上清不清澈,再離心3min)。
- 細菌、真菌:按照細胞數量104個:試劑一體積(ml)500~1000:1 的比例,建議500 萬細胞加入1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3 s,間隔7s,總時間3min)然后10000rpm,4℃,離心10min,取上清置冰上待測(如上清不清澈,再離心3min)。
- 血清等液體:直接測定。
二、GSH-Px測定操作: 1. 分光光度計預熱30 min,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。 2. 混合試劑在25℃或者37℃(哺乳動物)水浴中預熱30min以上。 3. 空白管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、800μL預熱的工作液,100μL試劑四,迅速混勻后于340nm處測定第10 s處的吸光值,37℃水浴3min后迅速拿出測量吸光度,分別記為A空1和A空2。計算△A空=A空1-A空2。(空白管只需做1~2個) 4. 測定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL預熱的工作液,100μL試劑四,迅速混勻后于340nm處測定第10 s處的吸光值,37℃水浴3min后迅速拿出測量吸光度,分別記為A測1和A測2。計算△A測=A測1-A測2。 三、GSH-Px活性計算: (1)按蛋白濃度計算 GSH-Px活力單位定義:一定溫度下,每mg蛋白在反應體系中每分鐘催化1nmol NADPH氧化定義為一個酶活力單位。 GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷[Cpr×V樣]÷T =536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr (2)按樣本鮮重計算 GSH-Px活力單位定義:一定溫度中,每g樣品在反應體系中每分鐘催化1μmol NADPH氧化定義為一個酶活力單位。 GSH-Px (U/g 鮮重)=[ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×106] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T =536×(△A測定管-△A空白管)÷W (3) 按細胞數量計算 GSH-Px 活力單位定義:一定溫度中,每104個細胞每分鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。 GSH-Px (U/104 cell)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷(細胞數量×V 樣÷V樣總)÷T =536×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞數量 (4) 按液體體積計算 GSH-Px 活力單位定義:一定溫度中,每毫升液體每分鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。 GSH-Px (U/ml)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷V 樣÷T =536×(△A 測定管-△A 空白管) △A空白管=A空1-A空2;△A測定管=A測1-A測2。 ε:NADPH摩爾消光系數6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,0.001 L;106:1 mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白濃度(mg/mL);V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL =0.1 mL;T:反應時間,3 min;W :樣品質量,g。 注意事項: (1)樣品處理等過程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力; (2)混合試劑和底物液須臨用前配制,配完后置于冰上; (3)測定過程操作須迅速; (4)細胞中GSH-Px活性測定時,細胞數目須在300萬-500萬之間,細胞中GSH-Px的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞。
相關文獻: 《Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice》 作者:Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,He Ying,Cao Yixin ,Zhang Yongmin,Sun Wenjia,Qiao Boling,He Jiao 期刊:Phytomedicine 影響因子:4.18 PMID:31005808 《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID: 《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448 |