產品名稱:還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒 常量產品英文名: Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit產品貨號:BC1170 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓產品規格:50管/48樣 產品商標:solarbio 保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:240 庫存狀態:現貨 關鍵字:還原型谷胱甘肽試劑盒|活性檢測試劑盒|GSH含量檢測|試劑盒
簡要介紹: GSH 是細胞內主要的抗氧化巰基物質,在抗氧化、蛋白質巰基保護和氨基酸跨膜運輸等中具有重要作用。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細胞氧化還原狀態的主要動態指標。因此,測定細胞內 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。 DTNB 與 GSH 反應生成復合物,在 412nm 處有特征吸收峰;其吸光度與 GSH 含量成正比。
產品詳細描述 產品內容: 試劑一:液體1瓶,50mL,4℃保存。 試劑二:液體1瓶,50 mL,4℃保存。 試劑三:液體1瓶,15 mL,4℃避光保存。 標準品:粉劑1支,10mg,4℃避光保存。 產品說明: 谷胱甘肽是由谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)和甘氨酸(Gly)組成的天然三肽,是一種含巰基(—SH)的化合物,廣泛存在于動物組織、植物組織、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-雙-(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應產生2-硝基-5-巰基ben甲酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。2-硝基-5-巰基ben甲酸為黃色產物,在波長412nm處具有大光吸收。 自備儀器和用品: 分析天平、微量勻漿器(規格2ml)、低溫離心機、水浴鍋、移液器、可見分光光度計,1ml比色皿。 樣品的處理 1、組織處理: 新鮮組織先用PBS沖洗2次,然后稱取動物組織或者植物組織0.1g。加入用試劑一潤洗過的勻漿器中(勻漿器提前放冰上預冷);然后加入1ml試劑一(組織/試劑一比例保持不變即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);8000g 4℃離心10min;取上清液放置于4℃待測,若暫時不能完成測試可放于-80℃保存(可保存10天)。 2、血液處理 血漿:將收集的抗凝血于4℃,600g離心10分鐘,吸取上層血漿到另一支試管中,加入等體積的試劑一, 4℃,8000g離心10分鐘,將上清移入新的試管中放置于4℃待測,若暫時不能完成測試可放于-80℃保存(可保存10天)。 血細胞:將收集的抗凝血于4℃,600g離心10分鐘,棄去上層血漿用3倍體積的PBS清洗3次(用PBS重懸血細胞,600g離心10分鐘),加入等體積試劑一,混勻后4℃放置10分鐘,8000g離心10分鐘,吸取上清放于4℃待測,若暫時不能完成測試可放于-80℃保存(可保存10天)。 3、細胞處理 收集不少于106個細胞,先用PBS清洗細胞2次(PBS重懸細胞,600g離心10分鐘),加入3倍細胞沉淀體積的試劑一重懸細胞,反復凍融2-3次(可在液氮中凍結,37℃水浴中溶解),8000g離心10分鐘,收集上清于4℃待測,若暫時不能完成測試可放于-80℃保存(可保存10天)。 操作步驟 - 分光光度計預熱30min以上,分光光度計調節波長412nm,蒸餾水調零。
- 試劑二放置37℃(哺乳動物)或25℃(一般物種)水浴中保溫30min。
- 空白管檢測:取1ml比色皿,依次加入100μL蒸餾水,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻,放置2min后測定412nm吸光度A1。
- 制作標準曲線
稱1mg標準品用1ml蒸餾水溶解,濃度為1mg/ml。取適當溶液配制濃度為200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml的標準品(試劑一十倍稀釋后進行稀釋)。 取1.5mlEP管依次加入100μL標準品,700μL試劑二,200μL試劑三,每管混勻后靜置2min,檢測412nm處吸光度,吸光度減去空白孔(A1)為橫坐標,根據吸光度(x)和濃度(y,μg/ml)做出標準曲線。 - 樣品管測定:取1ml比色皿,依次加入100μL樣品,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻后靜置2min檢測412nm處吸光度A2,△A= A2- A1。
GSH含量計算 根據標準曲線,將樣品△A帶入公式中(x),計算出樣品濃度y(μg/ml)。 (1)按蛋白濃度計算 GSH(μg / mg prot)=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr (2)按樣本質量計算 GSH(μg /g)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10 ÷W (3)按細胞數量計算 GSH(μg /104 cell)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)= y×10 ÷細胞數量 (4)按液體體積計算 GSH(μg / mL)= y×V 反總÷V 樣= y×10 V 反總:反應總體積,1mL;V 樣總:上清液總體積,1 mL;V 樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;W:樣品質量,g ;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL。 注意事項: - 樣品處理需勻漿*,若當天不能完成測量,可放-80℃保存。
- 標準品:還原型谷胱甘肽現配現用。
- 若不確定樣品中GSH含量的高低,可稀釋幾個梯度后再進行測量。
- 因為試劑一中含有蛋白質沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。
相關文獻: 《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》 作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li, Lei Zhang , Feng Wang, Ran‐ran Qin ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影響因子:10.754 PMID:29152896 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070 《Inhibition of MUC1‐C regulates metabolism by AKT pathway in esophageal squamous cell carcinoma》 作者:Xin GongSun YongQiang Zhao Bin Jiang ZhongWei Xin Mo Shi Liang Song QiMing Qin Qiang Wang XiangYan Liu 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30523643 《Light-Responsive Metal–Organic Framework as an Oxidase Mimic for Cellular Glutathione Detection》 作者:Yufeng Liu,Min Zhou,Wen Cao,Xiaoyu Wang,Quan Wang,Sirong Li and Hui Wei 期刊:Anal Chem. 影響因子:6.35 PMID:31148448 還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒 常量 |