產品名稱::谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒 微量法產品英文名: Micro Glutathion Reductases(GR) Assay Kit產品貨號:BC1165 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓產品規格:100管/96樣 產品商標:solarbio 保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:900 庫存狀態:現貨 關鍵字:谷胱甘肽還原酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GR活性檢測|試劑盒|微量法
簡要介紹: GR 是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,是谷胱甘肽氧化還原循環的關鍵酶之一(通常昆蟲中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化NADPH 還原 GSSG 生成 GSH,有助于維持體內GSH/GSSG比值。GR 在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用,此外 GR還參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環途徑。 GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH,同時不斷消耗NADPH生成NADP+;NADPH在340nm有特征吸收峰,相反NADP+在該波長無吸收峰;通過測定340nm吸光度下降速率;來測定NADPH脫氫速率,從而計算GR活性。
產品詳細描述 產品內容: 試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。 試劑二:液體1mL×1支,4℃保存。 試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入2.0mL蒸餾水,混勻。 產品說明: GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,GR催化GSSG還原生成GSH,是谷胱甘肽氧化還原循環的關鍵酶之一(通常昆蟲中GR被TrxR取代)。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH,有助于維持體內GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用,此外GR還參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環途徑。 GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH,同時NADPH脫氫生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在該波長無吸收峰;通過測定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率,從而計算GR活性。 自備儀器和用品: 低溫離心機、水浴鍋、移液器、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸餾水 操作步驟: 一、粗酶液提?。?/span> 稱約0.1g組織,加入1.0 ml試劑一,冰上充分研磨,10000rpm 4℃離心10min,取上清液,待測。 二、GR測定操作: 1. 分光光度計或酶標儀預熱30 min以上,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。 2. 試劑一置于25℃(普通物質)或者37℃(哺乳動物)中預熱30min以上。 3. 空白管:取微量石英比色皿或96孔板,加入10μL試劑二,20μL試劑三,170μL試劑一,于340nm測定10s和190s吸光度,記為A空1和A空2。 4. 測定管:取微量石英比色皿或96孔板,加入10μL試劑二,20μL試劑三,20μL上清液,150μL試劑一,于340nm測定10s和190s吸光度,記為A測1和A測2。 注:樣品測定10s時吸光度后,將比色皿放入25℃(普通物質)或者37℃(哺乳動物)水浴,3min后拿出,吸打混勻,立即測定190s時的吸光度。 三、GR活性計算: a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下 (1)按蛋白濃度計算 活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0條件下,每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADPH氧化為一個酶活力單位。 GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T = 0.536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr (2)按樣本鮮重計算 活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0條件下,每克樣品每分鐘催化1μmol NADPH氧化為一個酶活力單位。 GR酶活(U/g 鮮重)= [ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×106] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T = 0.536×(△A測定管-△A空白管)÷W △A空白管=A空1-A空2,△A測定管=A測1-A測2;ε:NADPH摩爾消光系數6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白濃度(mg/mL);W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL =2×10-2 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;V樣總:提取液體積, 1 mL;T:反應時間,3 min。 b.使用96孔板測定的計算公式如下 (1)按蛋白濃度計算 活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0條件下,每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADPH氧化。 GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定-△A空白)÷(ε×d)×V反總×106]÷(Cpr×V樣)÷T =0.893×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr (2)按樣本鮮重計算 活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0條件下,每克樣品每分鐘催化1μmol NADPH氧化。 GR酶活(U/g鮮重)= [(△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×106]÷(V樣÷V樣總×W÷T =0.893×(△A測定管-△A空白管)÷W △A空白管=A空1-A空2,△A測定管=A測1-A測2;ε:NADPH摩爾消光系數6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.6 cm;V反總:反應體系總體積,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白濃度(mg/mL);W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL =2×10-2 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應時間,3 min。 注意事項: (1)樣品處理等過程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力,勻漿液避免反復凍融; (2)試劑三須現配現用,配置完后,置于冰上; (3)測定前須先用1~2個樣做預實驗,確保180s內吸光值變化呈線性,哺乳動物組織一般須用試劑一稀釋2~5倍; (4)細胞中GR活性測定時,細胞數目須在300萬-500萬之間,細胞中GR的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞。
相關文獻: 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 《A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice》 作者:Zeyong Zhang,Huanhuan Liu,Ce Sun,Qibin Ma,Huaiyu Bu,Kang Chong,Yunyuan Xu 期刊:Journal of Plant Physiology 影響因子:2.825 PMID:30055519 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448 谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒 |