Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒 產品英文名:Ca++Mg++ ——ATPase Assay Kit產品貨號:BC0960 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓產品規格:50管/24樣 產品商標:solarbio 保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:260 庫存狀態:現貨 關鍵字:ATP酶活性檢測試劑盒|ATP檢測試劑盒|
簡要介紹: Ca++ Mg++-ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP 水解生成ADP 和無機磷。 根據Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及無機磷,通過測定無機磷的量來確定ATP 酶活性高低。
產品詳細描述 產品內容: 試劑一:液體30mL×1 瓶,4℃保存。 試劑二:液體4mL×1 瓶,4℃保存。 試劑三:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水充分混勻待用,現用現配。用不完的試劑-20℃可保存一周。 試劑四:液體2mL×1 瓶,4℃保存。 試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。用時加入3mL雙蒸水, 4℃保存。 試劑六:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。 試劑七:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。 試劑八:液體15mL×1 瓶,室溫保存。 標準品:10mmol/L 標準磷貯備液1mL×1 支,4℃保存。 0.5μmol/mL 標準磷應用液配制:將標準品 20倍稀釋,即取0.1mL標準品加1.9mL蒸餾水充分混勻。 定磷劑的配制:按H2O: 試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現用現配。 注意:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。 產品說明: Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP水解生成ADP和無機磷。 根據Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷,通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。 需自備的儀器及用品: 可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 操作步驟: 一、樣品酶液的制備: 1、細菌、細胞或組織樣品的制備: 細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。 組織:稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。 2、血清(漿)樣品:直接檢測。 二、測定步驟: 1、分光光度計預熱30min以上,調節波長660nm,蒸餾水調零。 2、酶促反應(在EP管中加入下列試劑) | 對照管 | 測定管 | 試劑一(μL) | 130 | 90 | 試劑二(μL) | 80 | 80 | 試劑三(μL) | 40 | 40 | 試劑四(μL) | | 40 | 樣品(μL) | | 200 | 混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)準確水浴10min | 試劑五(μL) | 50 | 50 | 樣品(μL) | 200 | | 混勻,4000g,常溫離心10min,取上清液 |
3定磷(1.5mLEP管中依次加入下列試劑) | 空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 | 0.5μmol/ml標準磷應用液(μL) | | 100 | | | 上清液(μL) | | | 100 | 100 | 蒸餾水(μL) | 100 | | | | 定磷試劑(μL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,40℃水浴10 min,冷卻室溫,在 660nm處比色。 三、計算 1、血清(漿)Ca++ Mg++- ATPase活力的計算: 定義:規定每小時每毫升血清(漿)中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/mL)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷V樣÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) 2、組織、細菌或細胞中Ca++ Mg++- ATPase活力的計算: (1)按蛋白濃度計算: 定義:規定每小時每毫克組織蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/ mg)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(Cpr×V樣)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr (2)按樣本鮮重計算: 定義:規定每小時每克組織中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/g)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W (3)按細菌或細胞密度計算: 定義:規定每小時每1萬個細菌或細胞中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/104)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) C標準管:標準管濃度,0.5μmol/mL;V總:酶促反應總體積,0.5mL;V樣:加入樣本體積,0.2mL ;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,1/6小時;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。 注意事項: 1、由于每一個樣都必須做對照,本試劑盒50管只能測 24份Ca++ Mg++-ATP酶。 2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。避免磷污染是檢測成敗的關鍵。 3、空白管和標準管只要做一管。
相關文獻: 《Apigenin suppresses the apoptosis of H9C2 rat cardiomyocytes subjected to myocardial ischemia?reperfusion injury via upregulation of the PI3K/Akt pathway》 作者:Zhengwen Zhou, Yue Zhang, Luning Lin, Jianmei Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:29901074 《Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake》 作者:Yu-Pu Jing, Hongli An, Shanjing Zhang, Ningbo Wang, Shutang Zhou 期刊:Journal of Biological Chemistry 影響因子:4.106 PMID: Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒 |